人(Human)弓蛔蟲lgG抗體(TC-IgG)檢測(cè)原理
試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被弓蛔蟲抗原的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD 值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中弓蛔蟲lgG抗體(TC-IgG)的存在與否。
人(Human)弓蛔蟲lgG抗體(TC-IgG)試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 |
陰性對(duì)照 | 0.5mL | 0.5mL | 無 |
陽性對(duì)照 | 0.5mL | 0.5mL | 無 |
檢測(cè)抗原-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | 無 |
人(Human)弓蛔蟲lgG抗體(TC-IgG)操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔,陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照各50μL;
3. 待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
4. 隨后陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。
人(Human)弓蛔蟲lgG抗體(TC-IgG)結(jié)果判斷
1. 試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00;
陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15。
2. 臨界值(Cut off)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
3. 陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性
4. 陽性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽性
人(Human)弓蛔蟲lgG抗體(TC-IgG)試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性:陽性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00;陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15,說明試驗(yàn)結(jié)果有效。
2. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
4. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
5. 有效期:6個(gè)月
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